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SIM實驗——SIM生化管

操作步驟：挑取菌苔穿刺接種于SIM培養基中，穿刺接種約1/2深度；用相同的方法接種福氏志賀氏菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特氏菌，之后放置于36℃培養箱培養18-24h。結果觀察： 1.接種福氏志賀氏菌的試管穿刺線清晰，未擴散，說明該菌無鞭毛，無動力； 2.接種鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特氏菌、大腸埃希氏菌穿刺線周圍有明顯的擴散現象，說明這類菌有鞭毛，有動力。 3.接種鼠傷寒沙門氏菌的試管變黑，其他試管無變黑，這是因為某些細菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養基中的鐵鹽反應生成黑色的硫化亞鐵沉淀。然后再滴加Kovacs靛基質試劑2-4滴于培養基表面，靜置10min，觀察試驗結果： 1.接種大腸埃希氏菌的試管上層有變紅，這是因為該菌能分解色氨酸，生成吲哚，吲哚與Kovacs靛基質試劑中的對二甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。 2.接種福氏志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特氏菌無變紅現象。

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OF生化管實驗

操作步驟： 1.用接種環蘸取純培養物，同時穿刺接種兩只生化管。 2. 其中一只生化管加蓋1cm后的滅菌液體石蠟，另一只不加。 3. 將兩只接種菌株的生化管用封口膜包裹封口。 4. 36?1℃培養18-24h后觀察試驗結果。實驗結果判斷： 1. 大腸桿菌為發酵型細菌，在有氧或無氧環境中都能分解葡萄糖產酸，所以兩支生化管均變黃。 2. 銅綠假單胞菌為氧化型細菌，在無氧環境中不能分解葡萄糖，所以加蓋石蠟的生化管不變黃，而不加石蠟的生化管變黃。 3. 糞產堿桿菌為產堿型細菌不能分解葡萄糖，所以兩支生化管均不變黃。

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MYP平板的制備——甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎（MYP）

配制要點： 1、加入時需注意不斷搖晃錐形瓶，使試劑分布均勻。 2、加入卵黃時溫度一定不能太高，否則卵黃變性，培養基將無法使用。 3、倒平板時盡量不要太厚，否則將不容易觀察結果。結果觀察：蠟樣芽孢桿菌：菌落為微粉紅色，周圍有淡粉紅色沉淀環；枯草芽孢桿菌：黃色菌落，無沉淀環；大腸桿菌，被抑制，不生長。

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MUG培養基實驗

操作步驟： 1.取細菌的新鮮培養物，用接種環接種于生理鹽水管中，振蕩混勻。 2.按照10倍系列稀釋法制備菌液，取接種量為10-100cfu的菌懸液，進行試驗。 3. 用移液槍吸取100μL稀釋好的菌液接種到MUG培養基管中，接種兩個平行管，同時吸取100μL生理鹽水接種到MUG培養基管中作為空白對照。 4. 相同的方法接種其他菌株，之后放置于30-35℃培養5-24小時結果觀察：發現接種大腸埃希氏菌和陰溝腸桿菌的試管變渾濁。而接種金黃色葡萄球菌的試管為澄清狀態。葡萄糖醛酸苷酶檢測：在黑暗環境中，使用366nm紫外燈照射培養后的試管，發現接種兩株大腸埃希氏菌的試管均產生藍白色熒光，這是因為MUG的β-糖醛酸苷鍵被大腸埃希氏菌產生的葡萄糖醛酸苷酶水解，釋放出4-甲基傘形酮，4-甲基傘形酮在紫外燈下可產生藍白色熒光。而接種陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌的培養管無藍白色熒光，說明這兩株菌不能產生葡萄糖醛酸苷酶。靛基質試驗：向培養后的試管滴加Kovacs靛基質試劑2-3滴，立即觀察結果，也可以放置室溫5-10min觀察結果。發現接種兩株大腸埃希氏菌的試管均有紅色環產生，這是因為蛋白胨中的色氨酸被大腸埃希氏菌產生的色氨酸酶分解，形成靛基質。靛基質與Kovacs靛基質試劑反應，形成紅紫色醌式化合物，即紅色環。而陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌培養管有黃色環，說明這兩株菌均不含有色氨酸酶。

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MR-VP實驗——MR-VP 甲基紅試劑 vp試劑~1

操作步驟： 1.挑取實驗菌苔接種于生理鹽水管中，制備菌懸液，本實驗以大腸埃希氏菌、單增李斯特氏菌、產氣腸桿菌為例，進行實驗； 2.然后用移液槍吸取100ul菌懸液，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養基中，每種菌接種2個試管； 3.之后放置于36℃培養24-48h。 MR實驗：向試管中滴加3滴甲基紅試劑，觀察顏色變化，接種大腸桿菌和單增李斯特氏菌的試管變紅，為陽性反應；接種產氣腸桿菌的試管不變紅，為陰性反應。實驗原理：不同細菌分解葡萄糖的產物不同，大腸桿菌、單增李斯特氏菌可分解葡萄糖產生大量酸，使pH值下降到4.5以下，所以滴入甲基紅顯紅色; 產氣腸桿菌產酸較少，所以滴入甲基紅顯橙黃色。 VP實驗：另取試管，向試管中滴加V-P試劑A液（6%α-萘酚-乙醇溶液）9滴，B液（40%氫氧化鉀溶液）3滴，建議最低使用量為A液6滴、B液2滴。充分振蕩混勻，之后置于36?1℃培養0.5-4h。培養結束后觀察結果，發現接種大腸桿菌的試管不變紅，為陰性反應；接種單增李斯特氏菌和產氣腸桿菌的試管變紅，為陽性反應。實驗原理：產氣腸桿菌、單增李特氏菌分解葡萄糖產生丙酮酸，并使丙酮酸脫羧，生成中性的乙酰甲基甲醇，在堿性溶液中被空氣氧化生成二乙酰,繼續與培養基中的胍基反應生成紅色化合物，即為V-P陽性。

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IMVic實驗——大腸埃希氏菌生化鑒定條~3

什么是IMViC試驗？ IMViC試驗是一項重要的腸桿菌科生化實驗，此實驗包括四個生化， I ：indol 靛基質（吲哚）試驗 M： Methyl red 甲基紅試驗 V：Voges-Prokauer VP試驗 C: Citeate utilization 西蒙氏檸檬酸鹽利用試驗操作步驟：第一步：制備菌懸液挑取一環待測菌的菌懸液，接種于生理鹽水管中，用旋渦混合器振蕩混勻，制成均一的細菌懸液；第二步：接種菌液至生化鑒定條用酒精棉擦拭鑒定條表面及打孔器，之后依次打孔，用移液槍吸取菌液，依次加入每個孔中，每孔100ul, 之后置于36℃?1℃培養24h。第三步：滴加試劑，觀察結果第1孔滴加靛基質試劑1-2滴第2孔滴加甲基紅試劑2-3滴第3孔滴加VP試劑A液3滴，VP試劑B液1滴結果觀察：大腸埃希氏菌ATCC25922的生化特征為：靛基質陽性，有玫紅色環甲基紅陽性，顯紅色 VP試劑陰性，不變紅（VP試劑滴加后，需20分鐘后再觀察結果，如為變紅色需延長至4h觀察結果，如仍未變紅色才可判定為陰性）西蒙氏檸檬酸鹽陰性，不變藍

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